相关。

此外，HLF的表达水平随着临床分级和阶段的提高而逐渐下降，TCGA，AEMeta和KMPlotter，在相同临床阶段的NSCLC患者中也有类似的发现。

综上所述，我们的研究结果表明，低表达HLF与NSCLC患者的早期进展和晚期临床病理特征显著正相关。

进一步研究发现，在NSCLC患者中，HLF下调与较短的局部无复发生存期和远处无转移生存期呈正相关。同样，低表达HLF的ADC患者以及SQC患者的局部无复发生存期和远处无转移生存期较差。以上结果说明，低表达HLF促进NSCLC早期局部复发和多器官远处转移。

为了进一步确定HLF在NSCLC细胞局部肺定植和远处转移中的作用，首先在多个不同亚型的NSCLC细胞株中检测了HLF的表达。

如补充图4A和B所示，与非癌永生化肺支气管上皮细胞BEAS2B和正常肺成纤维细胞WI38相比，NSCLC细胞中HLF的mRNA和蛋白质水平差异下调。我们进一步构建了HLF过表达的NCIH1975和NCIH520肺癌细胞，这些细胞表达所有NSCLC细胞系中HLF水平最低，并内源性下调NCIH460和NCIH1299细胞HLF的表达，这两种细胞均表达最高的内源性HLF水平。

值得注意的是，HLF表达的改变不仅影响大肺结节的形成，但也影响小肺结节的形成，这支持了HLF在肿瘤细胞的早期定植和随后的肺内生长中都起着重要作用的观点。

最后，与实验结束时相比，在注射HLF稳定过表达的H1975细胞和下调H460细胞的小鼠肿瘤组织中，进一步证实了相应的高和低表达水平。

然后，采用体内左心室接种小鼠模型检测HLF对NSCLC远处转移能力的影响，将载体/NCIH1975、HLF过表达NCIH1975、载体/NCIH460和HLFsh#1/NCIH460细胞接种到小鼠左心室。

接种细胞6周后，收集小鼠的胫骨、脑、肝组织，并进行H&E染色处理。如图所示。图3FI和补充图4G，我们在与载体组相比，过HLF表达小鼠组中，包括骨、大脑和肝脏等远处器官检测到较少的转移性肿瘤，以及较长的累积存活期延长。

相比之下，沉默HLF可显著增强骨、脑和肝脏转移瘤的形成，并缩短生存期。

因此，这些结果表明，低表达HLF的NSCLC细胞具有更强的局部定植和生长能力，以及更强的远处转移能力。

我们利用CCK8、集落形成和An连接素凋亡进一步研究了HLF在NSCLC中的生物学功能，发现在正常培养条件下，HLF对NSCLC细胞的增殖和凋亡能力没有显著影响。

我们的结果显示，上调HLF会增加培养液的PH水平，而沉默HLF会降低培养基的pH水平，但正常情况下HLF并不影响NSCLC细胞的表型和数量。

低表达HLF可能通过营养代谢途径促进NSCLC细胞对低营养状态的适应，因为即使在正常的含氧条件下，癌细胞也更倾向于通过厌氧途径代谢。

然而，上调HLF抑制NSCLC的生长，而沉默HLF可促进NSCLC细胞的锚定和悬浮生长能力，表明沉默HLF增强了NSCLC细胞在悬浮条件下的生存能力，即anoikis耐药。这是各种癌症中与远处转移有关的转移性癌细胞的主要特征。

事实上，昼夜节律基因的失调导致了NSCLC的代谢失调，HLF广泛参与了多种物质代谢过程，包括脂质和氧化代谢。

在低血清和低葡萄糖培养液组成的低营养条件下，HLF过表达抑制了